всеобщност
Имунофиксацията е лабораторен тест, който позволява идентифициране и типизиране на гама глобулини, присъстващи в биологична проба.
Подробно анализът позволява да се изследват - в кръвта или в урината на пациента - класовете имуноглобулини (IgA, IgG, IgM, IgE или IgD) и вида на леката верига капа или ламбда, според тяхната специфична електрофоретична мобилност., Впоследствие, за идентифициране на който гама глобулин е включен, имунофиксацията включва инокулиране на специфични антигени за фрагмента или съответното антитяло ( анти-имуноглобулинови антисеруми ): наличието на предполагаемата промяна се потвърждава от образуването на утайка, видима с невъоръжено око или под микроскоп.
Тази информация е от голямо значение, за да се установи по-специално диагностицирането на заболявания на плазмените клетки (гаммопатии или дискразии в плазмените клетки). Имунофиксацията е много полезна за оценка и мониторинг на множествена миелома, макроглобулинемия на Waldenström и първична амилоидоза (наричана още амилоидоза на леката верига).
Какво
Имунофиксацията (или имуноелектрофорезата, също съкратена до абревиатурата IFE ) е техника, която може да определи дали и кой клас имуноглобулини (IgG, IgM, IgA, IgD, IgE) или тип лека верига каппа или ламбда са налични в излишък или дефект в кръвния серум и урината на пациента.
Леките вериги капа и ламбда характеризират моноклоналния компонент, т.е. антителата с точно същата химична структура.
Sieric и Urinary Immunofixation: кога е посочено?
Плазмацелуларните дискразии или гамопатии са хетерогенна група нарушения с неизвестна етиология, характеризиращи се с:
- Пролиферацията на клонинг на В клетки е непропорционална ;
- Наличие в серум и / или урина на тип имуноглобулин (или на неговата полипептидна субединица), структурно и електрофоретично хомогенно ( моноклонално ).
Обикновено, плазмените клетъчни дискразии се диагностицират като се използва белтъчна електрофореза в серума и урина, последвано от серумна имунофиксация (IFE).
В същото време може да бъде предписан кръвен тест за измерване на общата концентрация на имуноглобулин (IgG + IgM + IgA).
За да научите повече: Имуноглобулини - какво представляват те, как се измерват и ценностиИмунофиксация: основен принцип
Имунофиксацията е двуфазно изследване (първо електрофореза с агарозен гел, след това имунопреципитация със специфични антисеруми ).
Първата стъпка на имунофиксацията е същата като тази на ЕЛЕКТРОФОРЕЗА на протеини (или протодигограма), затова е необходимо да се помни някаква концепция:
- Електрофорезата е лабораторен анализ, който позволява да се определи количеството протеини, присъстващи в кръвния серум или други биологични проби и за всяка фракция разкрива дали има някакви аномалии по отношение на качеството. По-специално, този тест позволява да се разделят протеините на пет групи: албумин, алфа 1 глобулин, алфа 2 глобулин, бета-глобулин и гама-глобулин ; последните са по-специфично изследвани с имунофиксация.
- Електрофорезата е метод за разделяне, основан на различната скорост на миграция на електрически заредени частици, чрез разтвор и инертна носител, под въздействието на електрическо поле, генерирано от постоянен ток. На практика тестът използва електрическия заряд и молекулната маса на протеините, присъстващи в пробата на пациента. Под импулса на електрическото поле тези макромолекули мигрират и "групират" по тип, отговаряйки на стреса по характерен начин. Резултатът ( електрофоретичен модел ) се състои от различни пикове и криви, на които съответстват фракциите на протеините. Обикновено първият пик, по-висок и по-тесен, е този на албумин ; след това се наблюдават пиковете на глобулините, много по-ниски от албумина. Увеличаването или намаляването на амплитудата и интензитета на пиковете, образувани в следата, показват по-голямо или по-малко присъствие на протеините от всяка категория; колкото повече протеини присъстват в лента, толкова по-висок е съответният пик. В случай на гама глобулини, ако искате да знаете количеството на всеки от различните класове (IgA, IgM, IgG и т.н.), ще трябва да прибегнете до единичната доза. Най-общо, колкото повече гама глобулини присъстват в лента, толкова по-висок е съответният пик; височината съответства на общото количество протеини, принадлежащи към определена категория.
IMMUNOFISSAZIONE предвижда:
1) Електрофореза с агарозен гел : пробата на пациента (серум или урина) се отлага върху електрофоретична лента, т.е. миграционна поддръжка (обикновено агарозен гел). Чрез прилагане на електрическо поле, генерирано от постоянен ток, се получава разделяне в различни ленти. На практика всеки вид гама глобулин, присъстващ в сместа (който е в пробата на пациента) мигрира според молекулната маса и електрическия заряд. Различната електрофоретична подвижност на гама глобулините позволява да бъдат идентифицирани (всяка от тях съвпада с определена лента в електрофоретичния път) и да се наблюдават всякакви аномалии.
2) Имунопреципитация със специфични антисера (фиксиране) : антигените, специфични за дадено антитяло или фрагмент (анти-IgG, анти-IgA, анти-IgM, анти-лека капа или анти-верига ) се добавят поотделно към всяка електрофоретична ивица. ламбда лека верига). Ако е налице моноклонален протеин, взаимодействието на антигена със съответното антитяло ще произведе тясна лента (това означава, че резултатът е положителен) и образуването на утайка, видима с невъоръжено око или под микроскоп. И накрая, пробата се обработва (т.е. измива се и се оцветява), за да се отстранят протеините, които не са утаени, за да се получи изсушаването на гела и да се продължи с отчитането на резултатите.
Защо да
Какво представлява Immunofixation?
Имунофиксацията на серума е тест, показан за диагностициране или проследяване на заболявания, характеризиращи се с промяна на гама глобулин, особено когато се отнася до производството на моноклонален компонент ( моноклонална гамапатия ).
За да научите повече: Моноклонални гамопатии - какво и какви са те »Имунофиксацията е полезна при съмнения за плазмена целуларна дискразия и е от съществено значение за изследването на MIELOMA (и свързаните с нея заболявания) и MGUS (акроним на "моноклонално гамапатие с несигурно значение").
Това изследване също позволява да се оцени макроглобулинемията на Waldenström и амилоидозата на леката верига ( AL ).
Имунофиксация: кога е предписан изпитът?
Показанието за имунофиксация е след клинични или лабораторни находки, които предизвикват съмнение за промени в моноклонални антитела или имуноглобулини в серум или урина.
Например, този тест позволява да се задълбочи резултата от електрофореза в серопро- или урината: когато в електрофоретичния път, лентите, които съответстват на гама-глобулините, се отклоняват от нормалността, имунофиксацията идентифицира кой от тези протеини е променен по отношение на количеството и качество.
В обобщение, серумната имунофиксация може да бъде предписана:
- В случай, че други лабораторни тестове осигуряват ненормален резултат, от гледна точка на отсъствие или по-ниски и по-високи количества плазмени протеини от нормалното;
- Когато подозираме наличието на болести, характеризиращи се с производството на моноклонален компонент, като:
- Множествен миелом и неговите варианти;
- Макроглобулинемия на Waldenström;
- амилоидоза;
- Когато пациентът има симптоми и признаци, които предизвикват съмнение за наличие на моноклонална гамопатия или множествена миелома, като:
- Костни болки;
- Анемия;
- Лесна умора;
- Повтарящи се инфекции;
- Неизяснени фрактури.
В случай на множествена миелома, протеиновата електрофореза и имунофиксацията също са много полезни за проследяване на развитието на заболяването (проследяване).
Имунофиксация: върху които могат да се извършват проби?
Биологичните проби, които могат да бъдат подложени на имунофиксация, са главно:
- Серум (серумна имунофиксация);
- Урина (имунофиксация на урина);
- Ликьор * (имунофиксация на течност).
* Забележка : гръбначно-мозъчната течност или течност е течността, която прониква и предпазва мозъка, гръбначния мозък, черепните нерви и гръбначните корени.
Нормални стойности
НЕГАТИВЕН резултат от имунофиксацията на серум и урина за моноклонални или поликлонални гама глобулини се счита за НОРМАЛЕН .
Глобулин
Гама-глобулините съставляват 9-20% от общите плазмени протеини.
- Референтна стойност Гама-глобулини : 0.9-1.4 g / dl
По отношение на общата концентрация на имуноглобулини ( IgG + IgM + IgA ) се счита, че стойностите между 600 и 2300 mg / dl са нормални.
- Референтна стойност Имуногебулин в серум :
- IgA : 90-400 mg / dl
- IgG : 800-1800 mg / dl
- IgM : 60-280 mg / dl
- IgD : 0.3-0.4 mg / dl
- IgE : 20-440 mg / dl
Забележка : Референтният интервал на изследването може леко да варира в зависимост от възрастта, пола и инструментариума, използван в лабораторията за анализ. Поради тази причина е за предпочитане да се консултират диапазоните, докладвани директно в доклада. Трябва също да се помни, че резултатите от анализите трябва да се оценяват като цяло от общопрактикуващия лекар, който познава анамнестичната картина на пациента.
Високи стойности - причини
Увеличението на гама глобулините може да бъде:
- Поликлонално, ако производството на имуноглобулини е хетерогенно, т.е. всички компоненти на обхвата на глобулините - произведени или получени от различни плазмени клетки - са засегнати от увеличението;
- Моноклонално, когато гама глобулини се произвеждат или получават от един тип (клон) на плазмени клетки.
Увеличаването на поликлоналния глобулин може да бъде свързано с: \ t
- Хронични възпалителни заболявания;
- Ревматоиден артрит;
- Системна лупус еритематозус;
- Хронични заболявания на черния дроб (като хепатит и цироза);
- Остри и хронични инфекции;
- Последни имунизации;
- Някои ракови заболявания.
Гама- стойностите на високите моноклонални глобулини могат да показват, вместо това, наличието на:
- Някои неоплазми и хронични възпаления;
- Множествен миелом;
- лимфом;
- Макроглобулинемия на Waldenström.
Излишък от гама глобулин се нарича хипергамаглобулинемия, докато дефицитът е известен като хипогамаглобулинемия .
Ниски стойности - причини
Намаляването на гама глобулините може да показва наличието на различни генетични заболявания на имунната система, включително агамаглобулинемия или вторичен имунодефицит (напр. СПИН, бъбречна недостатъчност, остър сепсис и синдром на Кушинг).
Намаляването на стойностите на гама глобулин може също да зависи от приема на цитостатични лекарства, имуносупресори и стероиди.
Как се изпълнява
Sieric Immunofixation
Имунофиксацията на серума включва просто изтегляне на кръв от вена на ръката. Серумът се получава чрез центрофугиране на биологичната проба; това всъщност позволява да се раздели фракцията, съдържаща клетките (корпускуларна част) от течната част на кръвта (плазма). Кръвният серум не съдържа коагулационни фактори (фибриноген, фактор VІІІ, фактор V и протромбин).
Имунофиксация на урината
За извършване на имунофиксация на урината е необходимо да се събере малко количество урина в специален стерилен контейнер. Според лекаря и лабораторните показания пробата може да бъде събрана без точен интервал ( случайно ) или в рамките на 24 часа .
Имунофиксация на течност
Анализът изисква отстраняване на малко количество гръбначно-мозъчна течност чрез вкарване на игла в гръбначната кухина ( лумбална пункция ).
подготовка
Имунофиксация: как да се подготвим за изпита?
- Преди вземането на кръвни проби някои лаборатории могат да изискват гладно поне 10-12 часа. През този период от време е позволено да се вземе малко количество вода.
- Имунофиксацията може да се извърши върху урината, събрана в определено време на деня (случайно) или по време на 24 часа, така че е необходимо предварително да се получат подходящи стерилни контейнери.
- Що се отнася до имунофиксацията на течността, обаче, не се изисква специална подготовка.
Какво може да промени изхода на изпита?
Някои лекарства могат да повлияят на резултата от имунофиксацията, така че е препоръчително да се докладва на лекаря за всички фармакологични лечения, които се провеждат.
През шестте месеца преди прегледа, прилагането на ваксини (имунизация) и употребата на лекарства, като фенитоин, прокаинамид, орални контрацептиви, метадон и терапевтични гама-глобулини, могат да повишат концентрацията на имуноглобулини. Други лекарства, които могат да променят резултатите от теста, са кортикостероиди, неомицин, ацетилсалицилова киселина и хлорпромазин.
Тълкуване на резултатите
Резултатът от имунофиксацията се оценява в комбинация с резултатите от други анализи. Интерпретацията на откритието зависи от общопрактикуващия лекар или референтния специалист, който може да идентифицира и докладва промени в специфични гама глобулини (например лентата, която съвпада с имуноглобулините G) с определени заболявания. Тази оценка потвърждава или подкрепя диагностичната хипотеза: по принцип имунофиксацията може да разкрие нормален гама-глобулинов профил или да идентифицира моноклонален протеин или поликлонален модел .
След като се дефинира болестта, може да се направи имунофиксация за:
- Проследявайте болестта с течение на времето, след това следвайте курса (проследяване);
- Проверете ефективността на терапевтичния протокол .
За и против на имунофиксацията
В сравнение с протеинова електрофореза, имунофиксация:
- Той е по-бърз : резултатите от имунофиксацията обикновено се получават в рамките на три часа;
- Той е по-чувствителен (макар и леко): имунофиксацията може да разкрие имуноглобулин, изключен от протеинова електрофореза, особено при ниски концентрации (по-малко от 1 грам / литър).
Освен това, имунофиксацията:
- Тя може да бъде частично автоматизирана ;
- Той е лесно четлив и интерпретируем .
Имунофиксацията обаче е по-скъпа от протеиновата електрофореза и позволява анализ на гама-глобулин .
Нормален резултат
В имунофиксацията нормалният път включва:
- Лента, която съвпада с по-тъмния имуноглобулин G ( IgG );
- Лента, съответстваща на по-лекия имуноглобулин А ( IgA );
- Отсъствието на лентата за имуноглобулин М ( IgM );
- Капа лентата е по-плътна от тази на ламбда (лека верига), със съотношение 2: 1.
При нормален резултат, лентите са големи и има постепенно и равномерно намаляване на плътността на цвета по краищата на имуноелектрофорезната лента.
Поликлонални гама глобулини
В някои случаи, всички ленти на имунофиксацията са хомогенно затъмнени в една и съща степен. Този модел представлява присъствието на поликлонални имуноглобулини . Също така в този случай лентите са големи и преходът към краищата на имуноелектрофорезната ивица е постепенно. IgM лентата - обикновено отсъстваща - е широка.
Моноклонални гама глобулини
Когато в пътя на имунофиксацията може да се идентифицира тясна лента с остри ръбове, това означава, че търсенето на моноклонални компоненти е положително .
Идентифицирането на моноклонален имуноглобулин е полезно при диагностициране на следните състояния:
- Моноклонална гамапатия с неопределена значимост (MGUS);
- Множествен миелом;
- Макроглобулинемия на Waldenstrom;
- Амилоидоза.
Освен това, имунофиксацията може да се използва за наблюдение на терапията в плазмените клетъчни дискразии (т.е. множествена миелома и макроглобулинемия на Waldenstrom). Ако нивото на моноклоналния протеин намалява или не може да се открие след химиотерапия, то може да означава отговор на лечението . За разлика от това, персистиращият моноклонален протеин, въпреки лечението, е признак на рефрактерна болест .
Забележка . Отрицателният резултат при имунофиксацията не винаги изключва плазмоцелуларна дискразия. Например, множествена несекреторна или олигосекреторна множествена миелома може да даде отрицателни резултати както в урината, така и в серума. Следователно, ако диагностичното подозрение за гамопатия е все още високо, е посочено определянето на съотношението на Light Kappa / Lambda Libere ( K / L съотношение ).
Имунофиксация и диагностика на множествена склероза
Имунофиксацията на цереброспиналната течност (CSF) се предписва, когато лекарят подозира наличие на множествена склероза . В този случай определената следа е характерна, тъй като подчертава наличието на така наречените олигоклонални ленти . Резултатът се съобщава в лабораторната находка като положителна . Трябва да се има предвид, че лентите обикновено не се наблюдават в имунофиксацията на серума, тъй като те корелират с производството на интратекални гама глобулини .
Обаче, трябва да се отбележи, че тази находка не задължително потвърждава диагнозата, тъй като други състояния могат да се проявят с олигоклонални ленти в цереброспиналната течност.
С други думи, идентифицирането на олигоклоналните ленти с имунофиксацията на течността е много полезно за поддържане на диагнозата на множествена склероза, но трябва да бъде потвърдено от други изследвания . Други състояния, които могат да доведат до такива резултати, са възпаление на централната нервна система, включително: ХИВ-свързан енцефалит, невросифилис, невросаркоидоза, лаймски менингоенцефалит, ЦНС злокачествени тумори, оптичен невромиелит и напречен миелит.
