ABTS есе
Това е аналитичен метод, който използва спектрофотометрично измерване за определяне на антиоксидантния капацитет на пробата. UV-Vis спектрофотометър се използва за измерване на абсорбцията на разтвор, съдържащ ABTS • + радикал, генериран от окисляването на ABST (2, 2'-азинобис (3-етилбензотиазолин-6-сулфонат), безцветно вещество, което е във формата радикаликата е оцветена чрез поглъщане на характерни дължини на вълните във видимия диапазон. Добавянето на антиоксидантни молекули към ABTS • + разтвор, който може да действа чрез водород и електронен трансфер, определя редукцията на радикала до безцветна форма, Това обезцветяване, пропорционално на наличното антиоксидант, може да бъде измерено като намаление на абсорбцията за определено време при определена дължина на вълната (734 nm). Антиоксидантната мощност се изразява в сравнение с стойностите на абсорбцията, измерени за известни количества от антиоксидантна молекула, избрана като референтен стандарт, която обикновено е аскорбинова киселина или Trolox (в този случай) се говори за антиоксидантната активност на TEAC Trolox Equivalent Antioxidant Capacity.
Измерването на антиоксидантната мощност въз основа на използването на ABTS има предимството, че е просто и бързо. Освен това, той позволява измерването на хидрофилни и липофилни антиоксиданти в широк диапазон на рН. Трябва обаче да се има предвид, че използваният радикал (ABTS • +) не е физиологичен и не присъства в биологичните системи и че често се подчертават проблемите на повторяемостта на измерванията, дължащи се на кинетиката на реакциите на различните участващи антиоксиданти.
FRAP (Антиоксидантна сила, намаляваща желязото)
Тестът FRAP измерва редуциращия капацитет на антиоксидантите срещу желязо. Това е метод, основан на трансфера на електрони, в който железните йони преминават от Fe3 + до Fe2 +. При определени условия на рН (3.6) и в присъствието на TPTZ (2, 4, 6-трис (2-пиридил) -с-триазин) тези йони образуват комплекси с различни характеристики, по-специално редуцираното производно (Fe2 +) -TPTZ) придобива син цвят, който има максимална абсорбция при 593 nm, която може да бъде измерена спектрофотометрично. Следователно, редуциращата способност на антиоксидантно вещество може да бъде измерена като промяна в абсорбцията на разтвора, съдържащ окислителя при дължината на вълната, установена за сравнение с изменението спрямо стандарт (например аскорбинова киселина).
Тестът FRAP е предназначен за измерване на редуциращата мощност на плазмата, но след това е адаптиран да тества антиоксидантния капацитет на чистите съединения и сложните матрици. В действителност, тъй като този метод позволява да се оцени само редуциращия капацитет чрез прехвърляне на електрони, напълно игнорирайки действието на антиоксиданти, които действат чрез прехвърляне на водород, той не позволява да се измери приносът на молекули, като тиоли и протеини, които играят антиоксидантна роля в биологични течности (напр. кръв). Предимството при използването на този метод е, че той е един от най-простите, най-бързите и най-евтините методи за определяне на in vitro антиоксидантния капацитет.
ТЕСТ DPPH
2, 2-дифенил-1-пикрилидразил (DPPH •) е много стабилен и търговски достъпен азотен радикал, характеризиращ се с интензивен червено-лилав цвят, който обезцветява, когато се редуцира в присъствието на молекула с антиоксидантна способност. Чрез спектрофотометрично измерване при 517 nm на вариацията на абсорбцията на разтвора DPPH след реакция с антиоксидантно съединение, е възможно да се определи количествено редукционната способност на изпитваното вещество дали тя действа чрез прехвърляне на водород или чрез електронен трансфер. Резултатът обикновено се изразява като IC50, т.е. количеството антиоксидант може да намали с 50% началната концентрация на DPPH.
Това е бърз, прост и икономичен метод. Границите на тази аналитична техника са дадени с възможността резултатите от анализа да бъдат фалшифицирани в случаите, когато тестовите молекули абсорбират в същия диапазон на дължината на вълната като DPPH радикал или в присъствието на големи молекули, обременени пространствено, което не те реагират с реактивната част на корена. Това определя, че DPPH реагира с антиоксиданти до 1000 пъти по-бавно от пероксилните радикали.
PCL ТЕСТ (фотохимилуминесценция)
PCL тестът се основава на реакцията на специфичен радикален вид, супероксидният анион (O2 • -), генериран фотохимично чрез ултравиолетова радиация, със съединение, способно да излъчва хемилуминесценция. Използваният маркер е луминол, молекула, която при окисление от свободните радикали излъчва светлина, която може да бъде измерена с помощта на специален инструмент (Photochem®). Наличието на антиоксиданти в хранителната смес дезактивира радикалните видове чрез инхибиране на емитирането на хемилуминесценция. PCL анализът е много бърз и чувствителен. Освен това, с прилагането на два различни аналитични протокола, наречени ACW (разтворим във вода антиоксидант) и ACL (разтворим в липиди на антиоксидантния капацитет), приносът към общия антиоксидант на капацитета на водоразтворимия компонент (флавоноиди, витамин) може да бъде измерен за същото съединение С, аминокиселини и др.) На липоразтворимия (токофероли, токотриеноли, каротеноиди и др.). За сравнение на стойностите, записани с измерванията спрямо стандартните референтни молекули, аскорбинова киселина за ACL протокола и Trolox за ACW протокола, се получава антиоксидантният капацитет на тестовия продукт.
